公表特許公報(A)_血液脳関門透過性の調節方法
彼女は生まれつき急速に老いる病、プロジェリアを患っていた。 そのちゃんが、急激に老いていく身体にもかかわらず前向きに姿に多くの人々が感銘を受けたが、にでその生涯を閉じた。 そしてこのほどで、同じ病に苦しみながらも充実した毎日を送る少女がいた。 『New York 』などが伝えている。 テキサス州に住む11歳のア・ちゃん（ ）は、「ハッチンソン・ギル・プロジェリア（HGPS）」を患っている。 この病は早老症とも呼ばれ、『Medical 』によるとと言われている。 生まれた時は健康だが、生後10か月～2歳で発育不全、の減少、皮膚の硬化などが見られ、成長するにつれてや、といった症状を発症し、前後で亡くなるが多いという。 現在、アちゃんは自分が13歳くらいまでしか生きられないということを分かっているようだ。 しかし彼女の毎日の生活は実に充実しているように見える。 アちゃんは自分の病をものともせず前向きにありのままの姿をに投稿している。 見た目は小さな老女のようだが、ではをしてヘアのウィッグでを楽しみ、をとったり、時には・から火がついた人気のダブ・（ダビング）を踊るなどして普通の11歳の少女と何ら変わらない様子を見せてくれる。 重病を抱えているとは思わせない彼女の前向きな姿が人々の心を捉えて、人気に火がつき始めた。 そして今では、などを含めアちゃんの全には1,万人以上のフォロワーがいる。 今や彼女は「の」と呼ばれているほどの人気ぶりである。 実際には、アちゃんがに登場したことで同情や哀れみの声もあがった。 そのことで彼女がに表立って登場することに、懸念を感じる人もいるようだ。 また心無い人からは、その姿をや地球外生物などと比較するような声もあったという。 アちゃんはそのようなことも物ともせず、今を精一杯自分の元気な姿の動画や写真を投稿し続けている。 彼女のには「ア、あなたってなんて可愛らしいの」「私の心を幸せにしてくれて」や、中には同年代の少女からと思われる「ア！ あなたって、なんてゴージャスなの。 あなたは私達にインスピを与えてくれる。 本当に」といったも見られた。 同じ病で9年前に亡くなったちゃんは「私は人前で悲しい顔はしたくない。 笑顔でいると、みんながになるでしょ」という言葉を遺しているが、アちゃんも同じ気持ちなのであろう。 なお、彼女が所有するで得た収益は、同じプロジェリアで苦しんでいる子供達の治療の研究に充てられている。 画像は『The 付「out to my daddy ＠pallibe for ing and me to get our h e」』の （Techinht編集部 Mher）.
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ハッチンソン・ギルフォード・プロジェリア症候群
本発明は、血液脳関門透過性の調節に関する。 中枢神経系（「ＣＮＳ」）に入り込む血液に対する関門は、本明細書において血液脳関門（「ＢＢＢ」）と集合的に呼ばれる。 ＢＢＢは、脳内の４００マイルの毛細血管および血管を覆う、内皮細胞の極めて緊密な層である（ランソホフ（Ransohoff）ら著、「中枢神経系への白血球移動のための３つまたはそれ以上の経路（Three or More Routes for Leukocyte Migration Into the Central Nervous System）」、ネイチャー・レビューズ・イミュノロジー（Nature Rev. Immun. ）、３：５６９〜５８１、２００３年（非特許文献１））。 ＢＢＢ細胞間のほぼ不透過性の接合部は、約２０種類の異なるタンパク質が互いにかみ合うことによって形成される。 分子は、膜に埋め込まれたタンパク質輸送体を介して、あるいは、ＢＢＢ細胞の蝋質外膜を直接すり抜けることによってＢＢＢ細胞に入り込まなければならない。 外来化合物は、いったん内側に入り込むと、外来物質を排除するよう予備刺激された様々な混然としたタンパク質ポンプおよび高濃度の代謝酵素を避けなければならない。 これらの障害物を避けたら、外来分子はその後、ＢＢＢ細胞の内膜を通過して最終的に脳へ達しなければならない。 これらの精巧な防御により、ＢＢＢは潜在的な損傷から脳を隔離することができるが、ＢＢＢはまた、脳内の疾患部位への神経薬の送達も妨害する。 学術研究機関ならびにバイオテクノロジーおよび医薬品産業の研究者は、ＢＢＢを迂回すること、または、ＢＢＢに潜在的な薬物を脳へ入れさせることを学んでいる。 彼らは、ＢＢＢを通って受動的に拡散するか、または栄養輸送体に乗って移動して脳の内側に達することができる小薬物を設計している。 他の者は、脳が無意識に飲み込むことになるように設計された潜在的な治療用物質を付着させている。 脳細胞に血液を供給する毛細血管は、血液脳関門を構成する（ゴールドシュタイン（Goldstein）ら著、「血液脳関門（The Blood-Brain Barrier）」、サイエンティフィック・アメリカン（Scientific American）、２５５：７４〜８３、１９８６年（非特許文献２）；パードリッジ（Pardridge）著、「血液脳関門を通る受動体介在性ペプチド輸送（Receptor-Mediated Peptide Transport Through the Blood-Brain Barrier）」、エンドクリン・レビューズ（Endocrin. Rev. ）、７：３１４〜３３０、１９８６年（非特許文献３））。 脳毛細血管を形成する内皮細胞は、身体の他の組織内に見出される細胞と異なる。 脳毛細血管の内皮細胞は、血液から脳およびＣＮＳの他部分への分子の受動拡散に対抗する連続壁を形成する密着した細胞間接合部により共に結合される。 これらの細胞はまた、他の組織において毛細血管壁を横切る多少の無差別輸送を可能にする飲作用胞をほとんど有しない、という点で異なる。 また、無制限通過を可能にし得る細胞間を延びる連続間隙またはチャネルを欠いている。 血液脳関門は、脳環境が絶えず制御されることを確実にするように機能する。 ホルモン、アミノ酸、およびイオンなどの、血液中の様々な物質のレベルは、食事および運動などの活動によってもたらされ得る頻繁な小変動を起こす（ゴールドシュタインら著、「血液脳関門」、サイエンティフィック・アメリカン、２５５：７４〜８３、１９８６年；パードリッジ著、「血液脳関門を通る受動体介在性ペプチド輸送」、エンドクリン・レビューズ、７：３１４〜３３０、１９８６年（非特許文献４））。 脳が、血液脳関門によって血清成分中のこれらの変化から保護されなければ、その結果は、無制御な神経活動となり得る。 脳は、血流から完全に隔離されるわけではない。 もしそうなら、脳は、栄養素の欠乏に起因して、および、身体の残りの部分と化学物質を交換する必要があることから、適切に機能することができないであろう。 毛細血管の内皮細胞内部の特異的輸送システムの存在が、脳が正常な成長および機能に必要な全ての化合物を制御された方法で受け取ることを確実にする。 多くの場合、これらの輸送システムは、特定の分子と選択的に結合し関門膜を横切ってこの分子を輸送する、膜結合タンパク質からなる。 これらの輸送体タンパク質は、溶質担体輸送体（solute carrier transporters）として知られている。 ＢＢＢは、ＣＮＳ疾患において潜在的毒性化合物への曝露からＣＮＳを保護することによって通常の条件下で保護機能を果たすと考えられているが、ＢＢＢは、治療化合物がＣＮＳ内に入り込むことを妨げることによって治療努力を妨害することもある。 例えば、多くの細菌感染症および真菌感染症は、感染症部位がＣＮＳの外側にある場合は容易に治療することができるが、ＣＮＳ内のそのような感染症はしばしば、非常に危険で、薬物の有効量を感染症部位に送達することができないことに起因して治療するのが非常に困難である。 同様に、ＢＢＢの作用が、ＣＮＳの外側に位置するガンの治療よりも、脳ガンの治療をより困難にしている。 ＣＮＳの外側に非常に大量の薬物を投与することによってＣＮＳ内に有効量の薬物を送達することが可能であっても、（血液中などの）ＣＮＳの外側の薬物レベルはその後、腎臓、肝臓、および他の生命維持に必要な器官に有害な毒性レベルに達するほど高くなることがしばしばある。 したがって当技術分野において、化合物のＣＮＳ内への送達を改善するための方法の必要性が存在する。 加えて、浮腫、脳外傷、脳卒中、および多発性硬化症を有している患者は、主要な損傷部位の近傍におけるＢＢＢの破損を示す。 破損レベルは、これらの疾患の臨床転帰に深刻な影響を及ぼしうる。 例えば、多発性硬化症（「ＭＳ」）を有している患者におけるＢＢＢ破損度は、疾患の重症度に相関する。 人がＭＳ「攻撃」を受けている場合、血液脳関門は、脳または脊髄の一部分において破損していて、それによりＴリンパ球と呼ばれる白血球細胞が血液脳関門を越え、かつミエリンを破壊しうることが、磁気共鳴映像法（「ＭＲＩ」）を使用して示された。 この関門の重要性にも関わらず、ＢＢＢの完全性および／または透過性を制御する分子機構についてほとんど知られていない。 ゆえに、そのような研究を促進する、特に診断的および／または治療的応用のための、組成物および方法に対する重要な必要性が依然として存在する。 本発明は、当技術分野におけるこれらおよび他の欠陥を克服することを対象にしている。 ランソホフ（Ransohoff）ら著、「中枢神経系への白血球移動のための３つまたはそれ以上の経路（Three or More Routes for Leukocyte Migration Into the Central Nervous System）」、ネイチャー・レビューズ・イミュノロジー（Nature Rev. Immun. ）、３：５６９〜５８１、２００３年ゴールドシュタイン（Goldstein）ら著、「血液脳関門（The Blood-Brain Barrier）」、サイエンティフィック・アメリカン（Scientific American）、２５５：７４〜８３、１９８６年パードリッジ（Pardridge）著、「血液脳関門を通る受動体介在性ペプチド輸送（Receptor-Mediated Peptide Transport Through the Blood-Brain Barrier）」、エンドクリン・レビューズ（Endocrin. Rev. ）、７：３１４〜３３０、１９８６年ゴールドシュタインら著、「血液脳関門」、サイエンティフィック・アメリカン、２５５：７４〜８３、１９８６年；パードリッジ著、「血液脳関門を通る受動体介在性ペプチド輸送」、エンドクリン・レビューズ、７：３１４〜３３０、１９８６年 本発明は、対象における血液脳関門透過性を増加させる方法に関する。 この方法は、増加した血液脳関門透過性から利益を得る可能性のある対象を選択する段階、および、選択された対象を処置に供する段階を含む。 この処置は、対象における血液脳関門透過性を増加させるのに有効な条件下で、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる。 本発明はまた、対象における血液脳関門透過性を減少させる方法に関する。 この方法は、減少した血液脳関門透過性から利益を得る可能性のある対象を選択する段階、および、選択された対象を処置に供する段階を含む。 この処置は、対象における血液脳関門透過性を減少させるのに有効な条件下で、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を減少させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を減少させる。 本発明はまた、中枢神経系の障害または状態について対象を処置する方法に関する。 この方法は、中枢神経系の障害または状態を有している対象を選択する段階、および、中枢神経系の障害または状態を治療するのに有効な治療用物質を提供する段階を含む。 アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる、血液脳関門透過剤が、提供される。 治療用物質および血液脳関門透過剤は、治療用物質が血液脳関門を通過して障害または状態を治療するのに有効な条件下で、選択された対象に投与される。 本発明はまた、血液脳関門透過性を増加させるのに効果的な化合物を選別する方法に関する。 この方法は、未改変の動物と比較して、低下したＣＤ７３発現レベル、低下したアデノシン発現レベル、および／または、調節されたアデノシン受容体活性を有する改変された動物を提供する段階を含む。 また、１つもしくは複数の候補化合物が提供され、その１つもしくは複数の候補化合物は、該改変された動物に投与される。 その後、その１つもしくは複数の候補化合物がアデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させるかどうかが、評価される。 該改変された動物において、アデノシンレベルまたは生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させるこれら候補化合物はその後、血液脳関門透過性を増加させるのに潜在的に効果的であるとみなされる。 本発明はまた、薬剤に関する。 この薬剤は、中枢神経系の障害または状態を治療するのに有効な治療用物質、および血液脳関門透過剤を有する。 この血液脳関門透過剤は、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる。 本発明の方法および薬剤は、血液脳関門に影響を与える障害を有している対象に対する改善された治療を提供する。 加えて、本発明は、そのような患者の治療的処置を高めるために血液脳関門を制御する改善された方法を提供する。 示された結果は、１１回の別個の実験を代表している。 図２Ｂは、未処置およびＭＯＧ免疫化後１３日目の野生型マウスからの脾細胞であって、ＣＤ４およびＣＤ７３の細胞表面発現についてフローサイトメトリーにより分析された、脾細胞を示している。 サンプルは、４匹のマウスから蓄え、３つの同様の実験から１つを代表する。 ＥＡＥを誘導し、疾患進行を毎日監視した。 結果は２つの別個の実験を代表している。 エラーバーは、平均値の標準誤差を表している。 ヘマトキシリン（hemotoxylin）染色された核の背景（青色）に対するＨＲＰ抗ラットＩｇ＋ＡＥＣ（赤色）を用いて免疫反応性を検出した。 矢印がリンパ球浸潤の部位を示す。 ヘマトキシリン（hemotoxylin）染色された核の背景（青色）に対するＨＲＰ抗ラットＩｇ＋ＡＥＣ（赤色）を用いて免疫反応性を検出した。 矢印がリンパ球浸潤の部位を示す。 スケールバーは５００ｍｍを表す。 移入およびＥＡＥ誘導後、１日目、３日目、８日目、および１５日目に、脾臓（図５Ａ）、リンパ節（図５Ｂ）、および脳（図５Ｃ）を取り出し、細胞を収穫した。 数値は、１．０を基準値に等しいものとし、移入／ＥＡＥ誘導後１日目の時点の各器官で見出された細胞パーセンテージに基準化した。 ２つの独立した実験のうちの一方からの結果を示している。 ヘマトキシリン（hemotoxylin）染色された核の背景（青色）に対するＨＲＰ抗ラットＩｇ＋ＡＥＣ（赤色）を用いて免疫反応性を検出した。 括弧がＣＤ７３染色を指し示している。 矢印はＣＤ４５リンパ球染色を指し示している。 図７Ａ〜図７Ｄは、アデノシン受容体遮断がマウスをＥＡＥの発症から保護するということを示している。 結果は１回の実験による（一群につき、ｎ＝５マウス）。 図７Ｂは、Ｚ３１０マウス脈絡叢細胞株におけるＧＡＰＤＨハウスキーピング遺伝子と比べたアデノシン受容体ｍＲＮＡの発現レベルを示している。 サンプルを３通りで実行した；エラーバーは平均値の標準誤差を表す。 図７Ｃは、マウスを、ＥＡＥ誘導の１日前に、およびＥＡＥ誘導後第３０日目まで毎日、４５％ＤＭＳＯ中、２ｍｇ／ｋｇのＡ２ａアデノシン受容体アンタゴニストＳＣＨ５８２６１（皮下に１ｍｇ／ｋｇおよび腹腔内に１ｍｇ／ｋｇ）（塗りつぶされた正方形、ｎ＝４マウス／群）、または、４５％ＤＭＳＯ単独（白抜き正方形、ｎ＝５マウス／群）で処置した後の結果を示している。 これらの結果は、２つの実験を代表している。 図７Ｄは、ＥＡＥ誘導後１５日目のＳＣＨ５８２６１処置およびＤＭＳＯ処置のマウスからの凍結組織切片内の、領域ごとに定量化された脳および脊髄中のＣＤ４＋浸潤リンパ球の平均数を示している。 エラーバーは平均値の標準誤差を表す。 マウスを、ＥＡＥ誘導の１日前に、およびＥＡＥ誘導後第３０日目まで毎日、ＤＭＳＯ中のＡ２ａアデノシン受容体アンタゴニストＳＣＨ５８２６１、２ｍｇ／ｋｇ（１ｍｇ／ｋｇは皮下に与え、１ｍｇ／ｋｇは腹腔内に与えた）（ｎ＝４マウス／群）、またはＤＭＳＯ単独（ｎ＝５マウス／群）で処置した。 これらの結果は１回の実験による。 画像は４匹の別個のマウスによるものである。 ＮＥＣＡで処置された野生型マウスはまた、対照マウスを超える増加を示している（図９Ｂ）。 百日咳はマウスＥＡＥモデルにおいて血液脳関門漏出を誘導することが知られているので、百日咳を陽性対照として使用した。 ヒト内皮細胞株ｈＣＭＥＣ／Ｄ３上でのアデノシン受容体発現を示している。 アデノシン受容体アンタゴニストであるＳＣＨ５８２６１がＦＩＴＣデキストラン溢出を阻害する間、アデノシン受容体アゴニストであるＮＥＣＡで処置された野生型マウスの血液脳関門を横切るＦＩＴＣデキストラン溢出の結果をグラフの形で示している。 マウスをアデノシン受容体アゴニストであるＮＥＣＡで処置した後、ＢｉｏＴｅｘ分光光度計によって６２０ｎｍにおいて測定された、血液脳関門を横切るエバンスブルー色素溢出の結果を示している。 本発明の一態様は、対象における血液脳関門透過性を増加させる方法を対象にしている。 この方法は、増加した血液脳関門透過性から利益を得る可能性のある対象を選択する段階、および、選択された対象を治療に供する段階を含む。 この治療は、対象における血液脳関門透過性を増加させるのに有効な条件下で、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる。 アデノシンは、低酸素、虚血、または炎症状態において生成される代謝困難の細胞シグナルである。 その主な仕事は、酸素供給／要求率の増加、プレコンディショニング、抗炎症作用、および、血管形成の刺激を含む、様々な受容体介在性メカニズムによって、組織損傷を減らし修復を促進することである（ジェイコブソン（Jacobson）ら著、「治療標的としてのアデノシン受容体（Adenosine Receptors as Therapeutic Targets）」、ネイチャー・レビューズ・ドラッグ・ディスカバリー（Nat. Rev. Drug Discov. ）、５：２４７〜２６４、２００６年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 アデノシンの生物学的効果は最終的には、受容体分布の異なるパターンおよび／または特定の細胞タイプにおける４つの既知のアデノシン受容体（「ＡＲ」）サブタイプの親和性によって決定される。 これは多くの細胞タイプ上に豊富に発現され、その細胞タイプには、リンパ球のサブセット（ヤマシタら著、「マウスリンパ球におけるＣＤ７３発現およびＦｙｎ依存性シグナル伝達（CD73 Expression and Fyn-Dependent Signaling on Murine Lymphocytes）」、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イミュノロジー（Eur. Immunol. ）、２８：２９８１〜２９９０、１９９８年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）、内皮細胞（ヤマシタら著、「マウスリンパ球におけるＣＤ７３発現およびＦｙｎ依存性シグナル伝達」、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イミュノロジー、２８：２９８１〜２９９０、１９９８年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）、および、上皮細胞（ストローメイヤー（Strohmeier）ら著、「ヒト腸管上皮におけるＣＤ７３の表面発現、極性化、および機能的意義（Surface Expression, Polarization, and Functional Significance of CD73 in Human Intestinal Epithelia）」、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション（J. Clin. Invest. ）、９９：２５８８〜２６０１、１９９７年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）が含まれる。 ＣＤ７３制御の適切な方法は、内容全体を参照により本願明細書に組み込むヤルカネン（Jalkanen）に付与された米国特許出願公開第２００６／０１９８８２１（Ａ１）号に記載されているように、組換えＣＤ７３タンパク質を投与すること、あるいは、内皮のＣＤ７３発現を誘導することができるサイトカインまたは別因子によるか、あるいは、両療法の組み合わせによることを含む。 より詳細には、本発明において使用されるべき適切な物質は、ＣＤ７３遺伝子の転写を直接的または間接的に上方制御するサイトカインまたは他の因子を含む。 本発明での使用のために適切なサイトカインは典型的には、インターフェロンまたはインターロイキンであるが、他の物質も使用されうる。 内皮のＣＤ７３発現を誘導できる任意のインターロイキンもまた、本発明での使用に適している。 一実施形態では、組換えＣＤ７３タンパク質またはサイトカインまたは双方の投与は、上昇した発現により、または組換えＣＤ７３タンパク質の直接的投与により得られる、上昇したＣＤ７３レベルの結果として産生されるアデノシンの源を保護するために、アデノシン一リン酸（「ＡＭＰ」）の投与と組み合される。 組換えＣＤ７３タンパク質またはサイトカインまたは双方の投与は、ＡＭＰがアデノシン二リン酸（「ＡＤＰ」）またはアデノシン三リン酸（「ＡＴＰ」）に転換するのを防ぐアデニル酸キナーゼ阻害剤の投与と共に行うことができる。 代替的に、組換えＣＤ７３タンパク質またはサイトカインまたは双方の投与は、アデノシンの変質を防ぐアデノシンデアミナーゼ阻害剤の投与と組み合わせてもよい。 このことはさらに、ＡＭＰ、および任意にＡＭＰがアデノシン二リン酸（ＡＤＰ）またはアデノシン三リン酸（ＡＴＰ）に転換するのを防ぐアデニル酸キナーゼ阻害剤も投与することと組み合わせることもできる。 （上述したようにＣＤ７３により生成されうる）細胞外アデノシンは、免疫細胞が中枢神経系に入り込むことを調整する。 したがって、ＢＢＢ透過性は、局所アデノシン濃度と共にアデノシン受容体活性により調節される：Ａ１受容体は、低アデノシン濃度で活性化され（高親和性）、Ａ２ａは、高アデノシン濃度で活性化される（低親和性）。 ゆえに、アデノシン有用性を増加させることは、ＢＢＢの透過性を増加させることになる。 逆に、アデノシンの有用性を減少させることは、ＢＢＢの透過性を減少させることになる。 加えて、ＣＤ７３レベルまたは活性を増加させることは、詳細を上述したように追加の局所アデノシンを産生し、それによりＢＢＢの透過性を増加させることになる。 ＣＤ７３酵素活性のプリンヌクレオシド生成物であるアデノシンは、細胞表面上の特異的受容体に結合する。 アデノシンは、多くの生理学的および病理学的現象に関与すると報告されている。 アデノシンは、全ての生細胞中に見出され、虚血または２０無酸素（20 anoxia）などの適切な条件下で放出されることができ、この場合アデノシンはその後、様々な生理学的効果を生み出すようにアデノシン受容体に作用することができる。 アデノシン受容体は現在、細胞外アデノシンと結合する内在性膜タンパク質として知られており、これによりＧタンパク質として知られている特異的グアニンヌクレオチド結合タンパク質を介して膜貫通シグナルを起こして、アデニル酸シクラーゼ、カリウムチャネル、カルシウムチャネル、およびホスホリパーゼＣを含む様々な第２メッセンジャー機構を調節する。 以下の文献の内容全体を参照により本願明細書に組み込む、スタイルズ（Stiles）著、「アデノシン受容体他：生理学的調節の分子機構（Adenosine Receptors and Beyond: Molecular Mechanisms of Physiological Regulation）」、クリニカル・リサーチ（Clin. Res. ）、３８（１）：１０〜１８、１９９０年；スタイルズ著、「アデノシン受容体（Adenosine Receptors）」、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリー（J. Biol Chem. ）、２６７：６４５１〜６４５４、１９９２年を参照されたい。 Ａ２Ａアデノシン受容体を活性化することは、ＢＢＢの透過性を増加させることになる。 適するアデノシン受容体Ａ２Ａ活性化因子は、当技術分野で周知であるＡ２Ａアゴニストである（プレス（Press）ら著、「アデノシン受容体アンタゴニストおよびアゴニストの治療可能性（Therapeutic Potential of Adenosine Receptor Antagonists and Agonists）」、エキスパート・オピニオン・オン・セラピューティック・パテンツ（Expert Opin. Ther. Patents）、１７（８）：１〜１６、２００７年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 他のＡ２Ａアデノシン受容体アゴニストは、リンディン（Lindin）らに付与された米国特許第６，２３２，２９７号および米国特許出願公開第２００３／０１８６９２６（Ａｌ）号、サブロッキ（Zablocki）らに付与された米国特許出願公開第２００５／００５４６０５（Ａ１）号、ならびにリー（Li）らに付与された米国特許出願公開第２００６／００４０８８８（Ａｌ）号、同第２００６／００４０８８９（Ａｌ）号、同第２００６／０１００１６９（Ａｌ）号および同第２００８／００６４６５３（Ａ１）号に記載されているアゴニストを含み、これら特許文献の内容全体を参照により本願明細書に組み込む。 そのような化合物は、オルソン（Olsson）らに付与された米国特許第５，１４０，０１５号および同第５，２７８，１５０号；クリスタリー（Cristalli）に付与された米国特許第５，５９３，９７５号；ミヤサカ（Miyasaka）らに付与された米国特許第４，９５６，３４５号；ハッチンソン（Hutchinson）ら著、「ＣＧＳ ２１６８０Ｃ，優先的降圧作用を有するＡ２選択的アデノシン受容体アゴニスト（CGS 21680C, an A2 Selective Adenosine Receptor Agonist with Preferential Hypotensive Activity）」、ジャーナル・オブ・ファーマコロジー・アンド・エクスペリメンタル・セラピューティックス（J. Pharmacol. Exp. Ther. Med. Chem. Pharmacol. これら文献の内容全体を参照により本願明細書に組み込む。 これらのアデノシンＡ２Ａ受容体アゴニストは、例示的であり、限定的ではないと意図されている。 Ａ１アデノシン受容体のブロッキングつまり不活性化もまた、ＢＢＢの透過性を増加させることになる。 適するアデノシン受容体Ａ１不活性化因子は、当技術分野で周知であるアデノシン受容体Ａ１アンタゴニストである（プレスら著、「アデノシン受容体アンタゴニストおよびアゴニストの治療可能性」、エキスパート・オピニオン・オン・セラピューティック・パテンツ、１７（８）：１〜１６、２００７年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 適するアデノシン受容体Ａ１アンタゴニストには、以下の特許文献の内容全体を参照により本願明細書に組み込む、ハーショル（Hocher）らに付与された米国特許出願公開第２００８／００２７０８２（Ａ１）号、ベラルディネッリ（Belardinelli）らに付与された米国特許第５，４４６，０４６号および同第５，６６８，１３９号、ニーリィ（Neely）に付与された米国特許第６，１１７，９９８号、ならびに、ウィルスン（Wilson）らに付与された米国特許第７，２４７，６３９号に、記載されたアンタゴニストが含まれるが、これらに限定されない。 ＢＢＢ透過性を増加させることにおいて、選択された対象は、中枢神経系（「ＣＮＳ」）障害を有していてよい。 ゆえに、全てのＣＮＳ関連状態および障害は、ＢＢＢ経路の薬物送達により治療されうることが認識される。 本発明の化合物は、経口的、非経口的、例えば皮下に、静脈内に、筋肉内に、腹腔内に、鼻腔内滴下により、または、鼻、咽喉、および気管支の粘膜などの粘膜への適用により、投与されうる。 これら化合物は、単独または適切な薬学的担体とともに投与されてもよく、錠剤、カプセル、粉末、液剤、懸濁剤または乳剤などの固形または液状でありうる。 本発明の活性化合物は、例えば不活性希釈剤を用いて、または同化性食用担体を用いて経口的に投与されてもよく、あるいは、本発明の活性化合物は、殻の堅いカプセルまたは殻の軟らかいカプセル内に封入されてもよく、あるいは、本発明の活性化合物は、錠剤に圧縮されてもよく、あるいは、本発明の活性化合物は、治療食の食品と直接組み合わされてもよい。 治療的経口投与については、これら活性化合物は、賦形剤と組み合わされてもよく、錠剤、カプセル、エリキシル、懸濁剤、シロップなどの形態で使用されてもよい。 そのような組成物および調製物は、少なくとも０．１％の活性化合物を含有すべきである。 これらの組成物中の化合物のパーセンテージは、当然ながら変えてもよく、好都合に単位重量の約２％〜約６０％の間であってよい。 そのような治療上有用な組成物中の活性化合物の量は、適した投与量が得られるような量である。 本発明による好ましい組成物は、経口投与量単位が約１〜２５０ｍｇの間の活性化合物を含有するように調製される。 錠剤、カプセルなどはまた、トラガカントゴム、アラビアゴム、コーンスターチ、またはゼラチンなどの結合剤；第二リン酸カルシウムなどの賦形剤；コーンスターチ、ジャガイモでんぷん、アルギン酸などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；および、スクロース、ラクトースまたはサッカリンなどの甘味剤も含有することができる。 投与量単位形態がカプセルである場合、上記種類の材料に加えて、脂肪油などの液体担体も含有することができる。 様々な他の材料が、被覆剤として、または投与量単位の物理的形態を変更するために、存在してもよい。 例えば、錠剤は、セラック、糖、またはその双方で被覆されてもよい。 シロップは、活性成分に加えて、甘味剤としてスクロース、保存料としてメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素、ならびに、サクランボ味またはオレンジ味などの香味料を含有してもよい。 これら活性化合物はまた、非経口的に投与されてもよい。 これら活性化合物の溶液または懸濁剤は、ヒドロキシプロピルセルロースなどの界面活性剤と適切に混合された水中に調製されうる。 分散系もまた、グリセロール、液体ポリエチレン・グリコール、およびそれらの油中混合物に調製されうる。 例示的な油は、例えばピーナッツ油、ダイズ油または鉱油である、石油由来、動物由来、植物由来、または合成由来の油である。 一般に、水、生理食塩水、水性デキストロースおよび関連糖溶液、ならびに、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールが、液体担体、特に注射可能溶液に好ましい。 貯蔵および使用の通常条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を妨げるために保存料を含有する。 注射使用に適している薬学的形態には、無菌の水溶液または水分散系、および、無菌の注射可能な溶液または分散系の即時調製のための無菌粉末が含まれる。 全ての場合において、この形態は、無菌でなければならず、そして容易な注射器利用性（syringability）が存在する程度に流体でなければならない。 この薬学的形態は、製造および貯蔵の条件下で安定でなければならず、そして細菌および真菌などの微生物の汚染作用から保護されなければならない。 担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例えばグリセロール、プロピレングリコール、および液体ポリエチレングリコール）、これらの適切な混合物、ならびに植物油を含有する、溶媒または分散媒でありうる。 本発明の化合物はまた、エーロゾルの形態で気道に直接投与されてもよい。 エーロゾルとして使用するために、溶液または分散系中の本発明の化合物は、例えば、従来の補助剤を含むプロパン、ブタンまたはイソブタンのような炭化水素噴射剤である、適切な噴射剤と共に加圧エーロゾル容器内に包装されてもよい。 本発明の材料はまた、ネブライザーまたはアトマイザーなどの非加圧形態で投与されてもよい。 本発明の別の態様は、対象における血液脳関門透過性を減少させる方法を対象にしている。 この方法は、減少した血液脳関門透過性から利益を得る可能性のある対象を選択する段階、および、選択された対象を治療に供する段階を含む。 この治療は、対象における血液脳関門透過性を減少させるのに有効な条件下で、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を減少させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を減少させる。 本発明のこの態様は、上述された薬学的製剤および投与方法を使用して実行されうる。 詳細に上述したように、ＢＢＢの透過性は、局所のアデノシンレベル、ＣＤ７３、および、アデノシン受容体活性により制御される。 アデノシン受容体の活性を変えることは、当技術分野において周知であるアデノシン受容体アンタゴニストおよび／またはアゴニストを提供することにより達成されうる（プレスら著、「アデノシン受容体アンタゴニストおよびアゴニストの治療可能性」、エキスパート・オピニオン・オン・セラピューティック・パテンツ、１７（８）：１〜１６、２００７年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 血液関門透過性を減少させるために対象のアデノシン受容体活性を変えることは、その対象にＡ２Ａアデノシン受容体アンタゴニストおよび／またはＡ１アデノシン受容体アゴニスト（ただし、これらに限定されない）を投与することにより達成されうる。 いくつかのアデノシンＡ２Ａ受容体アンタゴニストが、当業者に知られており、個別的または本明細書に記載された方法と併せて使用されうる。 これらのアデノシンＡ２Ａ受容体アンタゴニストは、例示的であり、限定するものではないことが意図される。 適するＡ１アデノシン受容体アゴニストには、内容全体を参照により本願明細書に組み込んだ、サブロッキ（Zablocki）らに付与された米国特許出願公開第２００５／００５４６０５（Ａ１）号に記載されたアゴニストが含まれる。 ＢＢＢ透過性を減少させることにおいて、選択された対象は、炎症性疾患を有していてよい。 そのような炎症性疾患には、炎症の媒介物質が血液脳関門を通過する疾患が含まれる。 そのような炎症性疾患には、細菌感染、ウイルス感染、または自己免疫疾患により引き起こされる炎症が含まれるが、これらに限定されない。 ＢＢＢ透過性が減少される場合、選択された対象はまた、リンパ球が脳へ入り込むことによって媒介される状態を有していてもよい。 本発明のさらに別の態様は、中枢神経系の障害または状態を有する対象を治療する方法を対象にしている。 この方法は、中枢神経系の障害または状態を有している対象を選択する段階、および、中枢神経系の障害または状態を治療するのに有効な治療用物質を提供する段階を含む。 血液脳関門透過剤（blood brain barrier permeabilizing agent）が提供され、この血液脳関門透過性剤は、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいはＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる。 治療用物質および血液脳関門透過剤は、その治療用物質が血液脳関門を通過して障害または状態を治療するのに有効な条件下で、選択された対象に投与される。 本発明のこの態様は、上述された薬剤および投与方法を用いて実行されうる。 治療用物質は、ＣＮＳの疾患または状態の治療において有用な任意の治療用物質を含んでよい。 そのような他の化合物は、抗生物質、抗寄生虫剤、抗真菌剤、抗ウイルス剤、および抗腫瘍剤を含むが、これらに限定されない任意のクラスの薬物または薬剤であってよい。 抗寄生虫剤、抗菌剤、抗真菌剤、抗腫瘍剤、抗ウイルス剤などと共に投与される場合、血液脳関門透過剤の化合物は、疾患の治療に適する任意の投与方法および投与経路によって、典型的には薬学的組成物として、投与されてよい。 治療薬は、（例えば、神経変性疾患の発症を阻害するか、または防ぐ）治療用物質として、または予防薬として送達されうる。 治療用物質は、治療される根本的な障害の根絶または改善を引き起こす。 予防薬は、疾患を発症させる危険性のある患者に、または、診断がまだされていないとしても、そのような疾患の１つまたはそれ以上の生理学的症状を訴える患者に投与される。 代替的に、予防薬投与は、特に根本的な障害の生理学的症状が周期的に現れる場合、その症状の発症を避けるために適用されてもよい。 この後者の実施形態では、該療法は、根本的な兆候の代わりに、付随する生理学的症状について予防をするものである。 特定の適用に有効な実際量は、とりわけ、治療される状態および投与経路に依存する。 本発明の別の態様において、治療可能剤は、生理活性タンパク質またはペプチドである。 そのような生理活性タンパク質またはペプチドの例には、細胞調節ペプチド、走化性ペプチド、抗凝固ペプチド、抗血栓ペプチド、抗腫瘍ペプチド、抗感染ペプチド、成長増強ペプチド、および、抗炎症ペプチドが含まれる。 タンパク質の例には、抗体、酵素、ステロイド、成長ホルモンおよび成長ホルモン放出ホルモン、ゴナドトロピン放出ホルモンならびにそのアゴニストおよびアンタゴニスト類似体、ソマトスタチンおよびその類似体、ゴナドトロピン、ペプチドＴ、チロカルシトニン、副甲状腺ホルモン、グルカゴン、バソプレシン、オキシトシン、アンギオテンシンＩおよびＩＩ、ブラジキニン、カリジン、副腎皮質刺激ホルモン、甲状腺刺激ホルモン、インスリン、グルカゴン、ならびに、前述の分子の多数の類似体および同類物が含まれる。 本発明のいくつかの態様において、ＢＢＢ透過性は、抗生物質または抗感染治療可能剤を送達するために本明細書の上記の１つまたは複数の方法によって調節される。 そのような抗感染剤は、微生物の活性を減少させるか、または微生物を死滅させる。 いくつかの実施形態では、治療用物質および血液脳関門透過剤は、単一「化合物」製剤として調製される。 このことは、複数の既知方法の任意のものによって達成されうる。 例えば、治療用物質および血液脳関門透過剤は、単一の薬学的に許容可能な賦形剤に混ぜ合わせることができる。 別のアプローチでは、治療用物質および血液脳関門透過剤は、別個の賦形剤中で調製され、その別個の賦形剤をマイクロカプセル化してから混ぜ合わせるか、あるいは、その別個の賦形剤が別個の薄膜を形成して単一丸剤などにすることもできる。 一実施形態では、治療用物質および血液脳関門透過剤は、共に結合される。 いくつかの実施形態では、治療用物質および血液脳関門透過剤は、単一化合物を形成するために、直接的に共に結合されるか、または、「テザー（tether）」または「リンカー（linker）」により共に結合される。 特定の理論に縛られずに、このような結合された化合物が改善された特異性／選択性を提供すると考えられている。 直接またはリンカー／テザーにより分子を結合するためのいくつかの化学は、当業者に周知である。 二官能性化合物を形成するために治療用物質と血液脳関門透過剤とを結合させるために利用される特定の化学は、治療用物質の化学的性質および所望とされる「リガンド間の」間隔によって決まる。 代替的に、これら成分は、追加の反応性官能基に曝露または結合するために誘導体化されうる。 この誘導体化は、イリノイ州ロックフォードのピアース・ケミカル・カンパニー（Pierce Chemical Company）より入手可能のリンカー分子など、いくつかのリンカー分子の任意のものの結合を含むことができる。 本明細書において使用される「リンカー」または「テザー（tether）」は、二官能性または多官能性化合物を形成するために、２つ以上のリガンド（例えば、治療用物質または血液脳関門透過剤）を結合させるように使用される分子である。 該リンカーは典型的には、二官能性または多官能性部分を含む成分の全てに共有結合を形成することができるように選択される。 適するリンカーは、当業者に周知であり、直鎖または分枝鎖炭素リンカー、複素環炭素リンカー、アミノ酸、核酸、デンドリマー、合成ポリマー、ペプチドリンカー、ペプチドおよび核酸類似体、炭水化物、ポリエチレングリコールなどを含むが、これらに限定されない。 いくつかの実施形態では、第一治療用物質上の基と反応する１つの官能基、および血液脳関門透過剤上の官能基と反応する別の基を有する二官能性リンカーは、二官能性化合物を形成するために使用されうる。 代替的に、誘導体化は、遊離アルデヒド基を生成するために成分を過ヨウ素酸で化学的処理（例えば、糖タンパク質、炭水化物、または核酸などの糖部分のグリコール開裂）することを含んでもよい。 これらの遊離アルデヒド基は、リンカーを化合物と結合させるためにリンカー上のヒドラジン基または遊離アミンと反応させることができる（例えば、内容全体を参照により本願明細書に組み込む、ロドウェル（Rodwell）らに付与された米国特許第４，６７１，９５８号を参照されたい）。 抗体または抗体断片などのポリペプチドの遊離スルフヒドリル基を生成するための手順もまた知られている（内容全体を参照により本願明細書に組み込む、ニコロッティ（Nicolotti）らに付与された米国特許第４，６５９，８３９号を参照されたい）。 治療用物質および血液脳関門透過剤が双方ともペプチドである場合、二官能性化合物は化学的に合成されるか、あるいは、互いに直接的に結合されるか、またはペプチドリンカーにより結合された、双方の成分を含む融合タンパク質として組換え的に発現されうる。 いくつかの実施形態では、リシン、グルタミン酸、およびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を基にした異なる長さのリンカーが成分を結合するために使用される。 分子をＰＥＧに結合するための化学は当業者に周知である（例えば、以下の文献の内容全体を参照によって本願明細書に組み込んだ、ベロネーゼ（Veronese）著、「ペプチドおよびタンパク質ペグ化（Peptide and Protein PEGylation）：問題および解決法の概説（a Review of Problems and Solutions）」、バイオマテリアルズ（Biomaterials）、２２：４０５〜４１７、２００１年；ザリプスキー（Zalipsky）ら著、「薬物のポリエチレングリコールへの結合（Attachment of Drugs to Polyethylene Glycols）」、ヨーロピアン・ポリマー・ジャーナル（Eur. Plym. ）、１９ １２ ：１１７７〜１１８３、１９８３年；オルソン（Olson）ら著、「ポリ（エチレングリコール）化ヒト増殖ホルモンアンタゴニストの調製および特性評価（Preparation and Characterization of Poly ethylene glycol ylated Human Growth Hormone Antagonist）」、ポリ（エチレングリコール）の化学および生物学的応用（Poly ethylene glycol Chemistry and Biological Applications）、１７０〜１８１、ハリスおよびザリプスキー編集、ＡＣＳ、ワシントンＤＣ、１９９７年；デルガド（Delgado）ら著、「ＰＥＧ結合タンパク質の使用および特性（The Uses and Properties of PEG-Linked Proteins）」、クリティカル・レビューズ・イン・セラピューティック・ドラッグ・キャリアー・システム（Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Sys. ）、９：２４９〜３０４、１９９２年；ペドレー（Pedley）ら著、「抗ＣＥＡ抗体のポリ（エチレングリコール）修飾による腫瘍局在化増加の可能性（The Potential for Enhanced Tumour Localisation by Poly ethylene glycol Modification of anti-CEA Antibody）」、ブリティッシュ・ジャーナル・オブ・キャンサー（Brit. Cancer）、７０：１１２６〜１１３０、１９９４年；エア（Eyre）およびファーヴァ（Farver）著、テキストブック・オブ・クリニカル・オンコロジー（Textbook of Clinical Oncology）、３７７〜３９０（ホルレーブ（Holleb）ら編集、１９９１年）；リー（Lee）ら著、「ポリエチレングリコールと結合した単一鎖Ｆｖタンパク質の長期循環寿命（Prolonged Circulating Lives of Single-chain of Fv Proteins Conjugated with Polyethylene Glycol）：共役化学および化合物の比較（a Comparison of Conjugation Chemistries and Compounds）」、バイオコンジュゲイト・ケミストリー（Bioconjug. Chem. Drug Targeting）、３：３２１〜３４０、１９９６年、を参照されたい）。 ある実施形態において、治療用物質および血液脳関門透過剤の結合は、グルタルアルデヒド、ＥＤＣＩ、塩化テレフタロイル、臭化シアンなどのそのような結合試薬の使用により、または、還元的アミノ化により、達成されうる。 ある実施形態において、成分は、国際公開第９３１７７１３（Ａ）号に開示された種類のヒドロキシ酸リンカーによって結合されうる。 ）、１： １７９〜１８１、１９９９年を参照されたい）。 本発明のさらなる態様は、血液脳関門透過性を増加させるのに効果的な化合物を選別する方法を対象にしている。 この方法は、未改変の動物と比較して、低下したＣＤ７３発現レベル、低下したアデノシン発現レベル、および／または、調節されたアデノシン受容体活性を有する改変された動物を提供することを含む。 また、１つもしくは複数の候補化合物も提供され、その１つもしくは複数の候補化合物は、該改変された動物に投与される。 その後、その１つもしくは複数の候補化合物がアデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させるかどうかが、評価される。 該改変された動物において、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させるこれら候補化合物はその後、血液脳関門透過性を増加させるのに潜在的に効果的であるとみなされる。 本発明のある実施形態において、本発明の方法はまた、形質転換動物を使用して実施されてもよい。 形質転換動物は、大きく２つのタイプ、すなわち「ノックアウト」および「ノックイン」に分類されうる。 「ノックアウト」は、好ましくは標的遺伝子発現がほんのわずかになるか、または検知されないような標的遺伝子の機能の減少を結果としてもたらす、形質転換配列の導入による標的遺伝子の変化を有する。 「ノックイン」は、例えば、標的遺伝子の追加複写物の導入により、あるいは、標的遺伝子の内因性複写物の発現増加を提供する調節配列を作動可能に挿入することにより、標的遺伝子の発現増加を結果としてもたらす宿主細胞ゲノムにおける変化を有する形質転換動物である。 ノックインまたはノックアウト形質転換動物は、標的遺伝子に対してヘテロ接合性またはホモ接合性でありうる。 本発明の形質転換動物は、ＣＤ７３、アデノシン、および／またはアデノシン受容体を過剰発現または低発現させることができるノックアウトまたはノックインとして大きく類別されうる。 本発明のある実施形態において、形質転換動物は、ＢＢＢ透過性調節を決定、識別、および／または定量化するためのモデル系を提供するように設計される。 そのような決定は、ＢＢＢ透過性の崩壊または改変の前または後を含む、動物の寿命の間の任意の時点で行われうる。 形質転換モデル系はまた、ＢＢＢ透過性を促進する、すなわち増加させる生物学的活性剤の開発のために使用されうる。 さらに、モデル系は、（例えば、外傷または疾患の結果によるＢＢＢ開放など、ＢＢＢ「開放」（すなわち透過性増加）後に）試験剤が関門を修復するか、または透過性を減少させるかどうかを検定するために利用されうる。 さらに、生体外技術を含む、細胞に基づく環境、すなわち細胞培養環境で行われるさらなる研究または検定のために、本発明の形質転換動物から細胞を単離することができる。 本発明のある実施形態では、該動物モデルは、その動物の神経系においてＢＢＢ透過性状態の改変をもたらす手順を受けることが可能な任意のヒト以外の脊椎動物を含む。 好ましいモデル生物体には、哺乳類、ヒト以外の霊長類、およびげっ歯類が含まれるが、これらに限定されない。 好ましいモデルの非限定例は、ラット、マウス、モルモット、ネコ、イヌ、ウサギ、ブタ、チンパンジー、および、サルである。 これらの試験動物は、野生型または形質転換型でありうる。 現在、胚顕微操作における技術進歩により、異種ＤＮＡを哺乳類の受精卵に導入することも可能である。 例えば、全能性または多能性幹細胞が、顕微注射、リン酸カルシウム媒介沈殿、リポソーム融合、レトロウイルス感染、または他の手段により形質転換されうる。 これらの形質転換された細胞はその後、胚の中に導入され、そしてその胚はその後、形質転換動物に発育することになる。 好ましい実施形態では、発育中の胚を、所望の導入遺伝子を含有するウィルスベクターに感染させて、感染させた胚から該導入遺伝子を発現する形質転換動物を生み出す。 別の好ましい実施形態では、所望の導入遺伝子は、好ましくは単一細胞期に、胚の前核または細胞質に同時注入され、その胚は成熟した形質転換動物に発育することができる。 形質転換動物を生み出すためのこれらおよび他の異なる方法は、当技術分野において十分に確立されており、ゆえに本明細書において詳述しない。 例えば、内容全体を参照により本願明細書に組み込んだ、米国特許第５，１７５，３８５号、および同第５，１７５，３８４号を参照されたい。 ＢＢＢ透過性は、当技術分野において知られている様々な指示薬を利用することによって試験されうる。 例えば、分子量が１８０ダルトンを超える色素、トレーサーまたはマーカーは、無処理ＢＢＢを通過するのを阻まれる。 検定は、マウス、ラット、イヌ、ブタ、またはサルを含むがこれらに限定するものではない、実験動物に行われうる。 適する指示薬には、血液脳関門透過性を決定、可視化、測定、識別、または定量化するために利用される、当技術分野において知られている任意の色素、マーカー、またはトレーサーが含まれる。 非限定例には、エバンスブルーおよびフルオレセインナトリウムが含まれる。 本発明のやはりさらなる態様は、薬剤を対象にしている。 この薬剤は、中枢神経系の障害または状態を治療するのに有効な治療用物質、および、血液脳関門透過剤を有し、この血液脳関門透過剤は、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる。 この医薬は、上述した方法と実質的に同じ方法で調製され投与されうる。 Exp. Med. ）、２００：１３９５〜１４０５、２００４年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）、Ｃ５７ＢＬ／６に対して１４世代にわたり戻し交配させた。 マウスは、コーネル大学またはトゥルク大学において特定病原体未感染条件下で、飼育され収容された。 アデノシン受容体遮断実験のために、ＤＭＳＯ（ＰＢＳ中４５体積％）中、０．６ｇ／Ｌのカフェイン（Ｓｉｇｍａ）または２ｍｇ／ｋｇのＳＣＨ５８２６１（１ｍｇ／ｋｇを皮下および１ｍｇ／ｋｇを腹腔内）、あるいは４５％ＤＭＳＯ単独を加えた飲料水をマウスに与えることを、ＥＡＥ誘導の１日前から始め、実験の間中、継続した。 マウスに実行される全ての手順は、関連動物審査委員会（relevant animal review committee）により承認された。 Immunol. Immunopathol. ）、７７：４〜１３、１９９５年、および、バイノ（Bynoe）ら著、「自己抗原ペプチドによる皮膚免疫は実験的アレルギー性脳脊髄炎を防止するＴサプレッサー細胞を誘導する（Epicutaneous Immunization with Autoantigenic Peptides Induces T Suppressor Cells that Prevent Experimental Allergic Encephalomyelitis）」、イミュニティー（Immunity）、１９：３１７〜３２８、２００３年に記載されているように、ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（「ＭＯＧ」）ＥＡＥ誘導措置をマウスに実施することによって誘導される。 これら文献の内容全体を参照により本願明細書に組み込む。 疾患症状重症度：すなわち、０＝疾患なし、０．５〜１＝弱い／力のない尾部、２＝力のない尾部および部分的な後肢麻痺、３＝完全後肢麻痺、４＝後肢および前肢両方の麻痺、５＝死亡、に基づいて、ＥＡＥについてマウスに毎日評点を付けた。 評点４のマウスは安楽死させた。 １週間後、脾臓およびリンパ節からリンパ球を採取し、赤血球を溶解するためにＡＣＫ緩衝剤（０．１５ＭのＮＨ４Ｃｌ、１ｍＭのＫＨＣＯ３、０．１ｍＭのＥＤＴＡ、ｐＨ７．３）と共にインキュベートした。 負の磁気を高めた後、ＣＤ４＋細胞を、直接使用するか、あるいは特定の亜集団にさらに分別した。 分別後の純度は決まって９９％を超えていた。 養子移入のために、ＣＤ４＋細胞または分別されたＴ細胞の全てを洗浄し、無菌ＰＢＳ中に再懸濁した。 細胞内ＦｏｘＰ３染色は、メーカー（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）の使用説明書にしたがって実行された。 染色された細胞をＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（ＢＤ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）上に得た。 ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ Ｓｔａｒ）でデータを分析した。 ）、９５８：３７１〜３８０、２００２年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 各ｑＰＣＲ生成物の特異性を測定するために融解曲線分析を行った。 Neurosci. これは、リンパ球上またはＣＮＳ中のいずれかにおけるＣＤ７３発現が、ＥＡＥの間リンパ球が脳へ入り込むために必要であることを示唆する。 ｃｄ７３＋／＋マウスは、広域スペクトルＡＲアンタゴニストカフェインおよびＡ２ａＡＲ特異的アンタゴニストＳＣＨ５８２６１によりＥＡＥ誘導から保護されていたので、このデータは、ＣＤ７３それ自体ではなく、ＣＤ７３により産生された細胞外アデノシンが、ＥＡＥの間リンパ球がＣＮＳ中に入り込むことを調整するということを示唆している。 これらの結果は、ＥＡＥの発症を調整することにおけるＣＤ７３およびアデノシンの役割を明らかにした最初のものである。 Immunol. ）、１６９：４７１２〜４７１６、２００２年：この内容全体を本願明細書に組み込む）。 Exp. Med. 同様に、ＣＤ７３を発現したＣＤ４＋Ｔ細胞のパーセンテージは、野生型マウスにおいてＥＡＥ誘導の後、穏やかにしか変化しなかった（図２Ｂ）。 Scler. Neuroimmunol. Autoimmun. ）、２３：１〜７、２００４年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）、ＥＡＥ進行の間、リンパ球はまず、ＣＮＳ抗原に対する炎症反応を開始するためにＣＮＳへのアクセスを獲得しなければならず、この結果、軸索脱髄および麻痺をもたらす（ブラウン（Brown）ら著、「炎症および神経変性事象の時間経過および分布は実験的自己免疫性脳脊髄炎の病変形成のための構造的基礎を提案する（Time Course and Distribution of Inflammatory and Neurodegenerative Events Suggest Structural Bases for the Pathogenesis of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis）」、ジャーナル・オブ・コンパラティブ・ニューロロジー（J. Comp. Neurol. ）、５０２：２３６〜２６０、２００７年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 したがって、Ｔ細胞上のＣＤ７３発現は、非造血細胞におけるＣＤ７３発現の欠如を部分的に補うことができるが、ＣＤ７３が両区画において発現される場合に、ＥＡＥは最も効果的に誘導される。 ＥＡＥの発症を促進するＣＤ７３発現非造血細胞の正体は、知られていない。 ＢＢＢにおける血管内皮細胞が、多くの種類の内皮細胞がＣＤ７３を発現するので、有望な候補として見なされた（ヤマシタ（Yamashita）ら著、「マウスリンパ球におけるＣＤ７３発現およびＦｙｎ依存シグナル伝達（CD73 Expression and Fyn-Dependent Signaling on Murine Lymphocytes）」、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イミュノロジー、２８：２９８１〜２９９０、１９９８年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 しかしながら、これらの実験の間、ＣＤ７３は脳内の脈絡叢上で高度に発現されることが観察された（図６Ｃ）。 脈絡叢とは、ＥＡＥ進行の間にリンパ球がＣＮＳ内へ入り込む入口点である（ブラウンら著、「炎症および神経変性事象の時間経過および分布は実験的自己免疫性脳脊髄炎の病変形成のための構造的基礎を提案する」、ジャーナル・オブ・コンパラティブ・ニューロロジー、５０２：２３６〜２６０、２００７年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 図４Ｄは、ＥＡＥ誘導後１２日目の野生型マウスの脈絡叢と関連するリンパ球の浸潤を示す。 また、極微のＣＤ７３染色が脊髄の髄膜下領域上に観察された。 総合すると、これらの結果は、ＣＤ７３の発現が、Ｔ細胞上であろうとＣＮＳ中（おそらく脈絡叢上）であろうと、効率的なＥＡＥの発症に必要であるということを示唆している。 Neurochem. ）、８６：２２０〜２２７、２００３年：これら文献の内容全体を参照により本願明細書に組み込む）、次に、ＡＲシグナル伝達がＥＡＥ進行の間、重要であるかどうか決定した。 Pharmacother. ）、３８：７１７〜７１８、２００４年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）により処置し、これはマウス１匹あたり１日４．０ｍｇのカフェインとなる、おおよその投与量に対応する（ヨハンソン（Johansson）ら著、「マウス脳におけるＡ１およびＡ２Ａアデノシン受容体ならびにＡ１ ｍＲＮＡ（A1 and A2A Adenosine Receptors and A1 mRNA in Mouse Brain）：長期カフェイン処置の効果（Effect of Long-Term Caffeine Treatment）」、ブレイン・リサーチ（Brain Res. ）、７６２：１５３〜１６４、１９９７年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）（図７Ａ）。 カフェインを摂取した野生型マウスは、ＥＡＥの発症から劇的に保護された（図７Ａ）。 これは先に公開された結果に匹敵する（ツツイら著、「Ａ１アデノシン受容体上方制御および活性化は、多発性硬化症モデルにおける神経炎症および脱髄を軽減する」、ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス、２４：１５２１〜１５２９、２００４年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 ＣＤ７３が脈絡叢上で高度に発現されるので（図６Ｃ）、次に、ＡＲもまた脈絡叢上で発現されるかどうかを決定した。 Ｚ３１０マウス脈絡叢細胞株を利用して（ツェンら著、「マウス脈絡叢からの不死化Ｚ３１０脈絡叢上皮細胞株の確立および特性評価」、ブレイン・リサーチ、９５８：３７１〜３８０、２００２年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）、Ａ１およびＡ２ａアデノシン受容体サブタイプのｍＲＮＡのみをｑＰＣＲにより検出した（図７Ｂ）。 野生型マウスに、１ｍｇ／ｋｇのＤＭＳＯ中ＳＣＨ５８２６１またはＤＭＳＯ単独を腹腔内および皮下の両方で（合計２ｍｇ／ｋｇ）ＥＡＥ誘導の１日前、および実験の全期間にわたって３０日間、毎日与えた（図７Ｃ）。 ＳＣＨ５８２６１を摂取した野生型マウスは、ＤＭＳＯ単独を摂取した野生型マウスと比較して、ＥＡＥの発症から劇的に保護された（図７Ｃ）。 加えて、ＳＣＨ５８２６１を与えられた野生型マウスは、ＤＭＳＯ処置された野生型マウスと比較して、ＥＡＥ誘導後１５日目の時点で、脳および脊髄におけるＣＤ４＋リンパ球の頻度に有意な低下を示した（図７Ｄ）。 Res. Tech. ）、５２：１１２〜１２９、２００１年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）、ＳＣＨ５８２６１処置が、ＥＡＥ誘導に続いて脈絡叢上での接着分子発現に影響を及ぼしたかどうかを決定した。 この研究の目的は、ＭＳについての動物モデルのＥＡＥにおけるＣＤ７３の役割を評価することであった。 Ther. Acad. Sci. ）、１１１０：６４１〜６４８、２００７年：この内容全体を本願明細書に組み込む）。 対照的に、本発明者らのデータは、ＣＤ７３およびＣＤ７３により産生された細胞外アデノシンは病原性Ｔ細胞のＣＮＳ内への効率的な通過にとって必要とされることを示唆している。 したがって、ＣＤ７３およびアデノシンがＥＡＥの間にＣＮＳリンパ球浸潤において担う役割は、神経炎症の調節におけるそれらの役割よりも重大である。 ＣＮＳ中へのＴ細胞移動のためにＣＤ７３がどこで発現されるべきかを知ることは重要である。 ＣＤ７３は、Ｔ細胞のサブセット上（ヤマシタら著、「マウスリンパ球におけるＣＤ７３発現およびＦｙｎ依存性シグナル伝達」、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イミュノロジー、２８：２９８１〜２９９０、１９９８年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）ならびにいくつかの上皮細胞上（ストローメイヤーら著、「ヒト腸管上皮におけるＣＤ７３の表面発現、極性化、および機能的意義」、ジャーナル・オブ・クリニカル・インベスティゲーション、９９：２５８８〜２６０１、１９９７年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）および内皮細胞上（ヤマシタら著、「マウスリンパ球におけるＣＤ７３発現およびＦｙｎ依存性シグナル伝達」、ヨーロピアン・ジャーナル・オブ・イミュノロジー、２８：２９８１〜２９９０、１９９８年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）に見出される。 Pathol. ）、１４８：１８１９〜１８３８、１９９６年：この内容全体を本願明細書に組み込む）。 該脈絡叢はまた、ＥＡＥ進行の開始の間、Ｔ細胞のための入口点であると示唆されている（ブラウンら著、「炎症および神経変性事象の時間経過および分布は実験的自己免疫性脳脊髄炎の病変形成のための構造的基礎を提案する」、ジャーナル・オブ・コンパラティブ・ニューロロジー、５０２：２３６〜２６０、２００７年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 次の問題は、ＣＤ７３がＴ細胞のＣＮＳへの移動をどのように促すかである。 代替的に、ＣＤ７３は、細胞表面ＡＲのためのリガンドである細胞外アデノシンを産生するために酵素として機能することができる。 カフェインまたはＳＣＨ５８２６１によるＡＲ遮断はマウスをＥＡＥから保護しうることを考慮すると、現在与えられている研究に関連するのはこの後者の機能である。 広域スペクトルＡＲアンタゴニストカフェインもまた、特定のホスホジエステラーゼを阻害するが（チョウイ（Choi）ら著、「カフェインおよびテオフィリン類似体（Caffeine and Theophylline Analogues）：アデノシン受容体アンタゴニストとしておよびホスホジエステラーゼ阻害剤としての活性と行動的影響との相関関係（Correlation of Behavioral Effects With Activity as Adenosine Receptor Antagonists and as Phosphodiesterase Inhibitors）」、ライフ・サイエンシス（Life Sci. ）、４３：３８７〜３９８、１９８８年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）、ＥＡＥ進行の広域スペクトルＡＲアンタゴニストカフェインの調節は、たいがいＡＲシグナル伝達への影響による（ツツイら著、「Ａ１アデノシン受容体上方制御および活性化は、多発性硬化症モデルにおける神経炎症および脱髄を軽減する」、ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス、２４：１５２１〜１５２９、２００４年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 この説は、ＳＣＨ５８２６１もまたＡ２ａＡＲシグナル伝達を特異的に阻害することによってＥＡＥ進行を防ぐという事実により支持される。 ＣＤ７３ならびにＡ１およびＡ２ａＡＲサブタイプは脈絡叢上で発現されるので、脈絡叢においてＣＤ７３により産生された細胞外アデノシンは、自己分泌方式でシグナル伝達することができる。 該Ａ１およびＡ２ａＡＲは機能的に互いに対して拮抗し、アデノシンに対して異なる親和性を有するので（カルタ（Quarta）ら著、「側坐核の殻内でのグルタミン酸およびドーパミン放出におけるアデノシンＡ１およびＡ２ａ受容体が果たす正反対の調節性役割。 慢性的カフェイン曝露の効果（Opposite Modulatory Roles for Adenosine A1 and A2A Receptors on Glutamate and Dopamine Release in the Shell of the Nucleus Accumbens. ＣＮＳにおいて、このＡ１／Ａ２ａ相互作用が神経炎症を媒介することにおいて重要であると示唆する根拠があり、ここで、Ａ１シグナル伝達は保護的である一方、Ａ２ａシグナル伝達は炎症を促進する。 例えば、Ａ１アデノシン受容体を欠くマウスは疾患誘導に続いて重篤なＥＡＥを発症させる一方（ツツイら著、「Ａ１アデノシン受容体上方制御および活性化は、多発性硬化症モデルにおける神経炎症および脱髄を軽減する」、ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス、２４：１５２１〜１５２９、２００４年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）、Ａ２ａアンタゴニストを与えられたマウスは、ＥＡＥから完全に保護される（図５Ｃ）。 加えて、Ａ２ａ受容体を欠くマウスは、一過性局所虚血により誘導された脳損傷から保護される（チェン（Chen）ら著、「Ａ ２Ａ アデノシン受容体欠損は、マウスにおける一過性局所虚血により誘導された脳損傷を和らげる（A 2A Adenosine Receptor Deficiency Attenuates Brain Injury Induced by Transient Focal Ischemia in Mice）」、ジャーナル・オブ・ニューロサイエンス、１９：９１９２〜９２００、１９９９年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む）。 したがって、脈絡叢におけるＣＤ７３産生アデノシンシグナル伝達は、ＣＮＳでの炎症を調節することにおいて非常に重要な役割を担うように思われる。 このアデノシンシグナル伝達はおそらく、脈絡叢での接着分子の発現を調整するだろう。 要約すると、このデータは、ＣＤ７３がＥＡＥの進行において重大な役割を担うことを示す。 ＣＤ７３を欠くマウスは、ＥＡＥ誘導と関連する変性症状およびＣＮＳ炎症から保護される。 このことは、ＥＡＥの間にリンパ球がＣＮＳ内へ効率的に入り込むためのＣＤ７３発現およびＡＲシグナル伝達の必要性を証明する最初の研究である。 ここに提示されたデータは、ＭＳおよび他の神経炎症疾患に対する新規療法へつながることになる旅路の第１歩を印する可能性がある。 ＮＥＣＡは、Ａ１、Ａ２ａおよびＡ３アデノシン受容体に対して同様の親和性を有し、かつＡ２ｂアデノシン受容体に対して低い親和性を有する非選択的アデノシン受容体アゴニストである。 エバンスブルーを投与して４時間後に、ケタミン／キシラジン混合物でマウスに麻酔をし、左心室を介して氷冷ＰＢＳで灌流した。 組織をＤＭＦ中で７２時間、室温でインキュベートして色素を抽出した。 一般的なアデノシン受容体アゴニストＮＥＣＡでマウスを処置することは、血液脳関門を横切る色素の移動を誘導することができる。 このことは、この関門がアデノシン受容体の活性化を通して調節されうることを示唆する。 本発明者らは、このアンタゴニストを使用したＡ２ａアデノシン受容体の遮断はリンパ球が脳へ入り込むことを防ぐことができる、ということを示したので、ＳＣＨ５８２６１を陰性対照として使用した ミルズ（Mills）ら著、「実験的自己免疫性脳脊髄炎の間、リンパ球が中枢神経系内へ効率的に入り込むためにＣＤ７３が必要である（CD73 is Required for Efficient Entry of Lymphocytes into the Central Nervous System During Experimental Autoimmune Encephalomyelitis）」、プロシーディングス・オブ・ザ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンシス（Proc. Natl. Acad. Sci. ）、１０５（２７）：９３２５〜９３３０、２００８年：この内容全体を参照により本願明細書に組み込む。 図９Ｂにおいて、ＮＥＣＡで処置された野生型マウスもまた、対照マウスを超える増加を示している。 百日咳がマウスＥＡＥモデルにおいて血液脳関門漏出を誘導することが知られているので、百日咳を陽性対照として使用する。 ここで、これらの細胞におけるアデノシン受容体の発現パターンを確立した。 ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞をコンフルエントまで増殖させて採取し、ＴＲＩｚｏｌ試薬（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、カリフォルニア州カールズバッド）をメーカーの使用説明書にしたがって使用してＲＮＡを抽出した。 Ｖｅｒｓｏ ｃＤＮＡキット（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、マサチューセッツ州ウォルサム）を使用してｃＤＮＡを合成し、Ｐｏｗｅｒ ＳＹＢＲ Ｇｒｅｅｎ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州フォスター・シティー）を使用してリアルタイムＰＣＲを実行した。 図１０に示されているように、Ａ２ａおよびＡ２ｂアデノシン受容体は、ヒト内皮細胞株ｈＣＭＥＣ／Ｄ３において発現されることが見出された。 ＥＡＥの後期の間、リンパ球はＢＢＢを横断することが知られている。 脳内皮細胞のアデノシン受容体刺激がＢＢＢを通るリンパ球移動を促進することができるかどうかを決定するために、生体外ＢＢＢを確立した。 ＢＢＢ特性を有するとして先に説明されたヒト脳内皮細胞株ｈＣＭＥＣ／Ｄ３（ウエクスラーら著、「ヒト成人脳内皮細胞株の血液脳関門特異的特性」、ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー、１９（１３）：１８７２〜４、２００５年；ポラーら著、「薬物輸送研究のためのヒト血液脳関門モデルとしてのヒト脳内皮細胞株ｈＣＭＥＣ／Ｄ３」、ジャーナル・オブ・ニューロケミストリー、１０７（５）：１３５８〜１３６８、２００８年：これら文献の内容全体を参照により本願明細書に組み込む）を取得した。 ｈＣＭＥＣ／Ｄ３細胞をＴｒａｎｓｗｅｌｌ上に播種し、コンフルエントになるまで増殖させた。 ２４時間後、下層チャンバ内の移動した細胞を数えた。 数値を、ＨＣＭＥＣＤ３を播種していないｔｒａｎｓｗｅｌｌを通って移動した細胞の数と比べる。 図１１に示されたように、広域スペクトルアデノシン受容体アゴニストであるＮＥＣＡはいくらかの移動を誘導した。 Ａ２ａアデノシン受容体アゴニストであるＣＧＳは、より低濃度で使用された場合、生体外ＢＢＢを横切るリンパ球移動を促進した。 Ａ１アゴニストであるＣＣＰＡは、高レベルでリンパ球移動を誘導した。 これは、おそらくＣＣＰＡに対してより低い親和性を有し、ゆえにＣＣＰＡのより高いレベルでのみ活性化される、Ａ２ａアデノシン受容体の活性化に起因する。 ＣＰはＡ１およびＡ２ａアデノシン受容体を発現させる。 マウスにおいて、Ａ２ａアデノシン受容体活性が遮断されるとＥＡＥが妨げられる。 Ａ１アデノシン受容体が欠損しているとＥＡＥが助長される。 Ａ２ａアデノシン受容体活性化がＣＰを横切るリンパ球移動を促進すると仮定された。 Ｚ３１０細胞は、マウス脈絡叢細胞株である。 この仮定を試験するために、Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ膜にＺ３１０細胞を播種しコンフルエントになるまで増殖させた。 ２４時間後、下層チャンバ内の移動した細胞を数えた。 数値を、Ｚ３１０を播種していないｔｒａｎｓｗｅｌｌを通って移動した細胞の数と比べ、その結果を図１２に示した。 図１２に示されているように、広域スペクトルアデノシン受容体アゴニストであるＮＥＣＡは移動を誘導した。 Ａ２ａアデノシン受容体アゴニストであるＣＧＳは、ＣＰを横切るリンパ球移動を促進した。 Ａ１アゴニストであるＣＣＰＡは、高いレベルでリンパ球移動を誘導した。 これはおそらく、ＣＣＰＡに対してより低い親和性を有し、そのため高いレベルのＣＣＰＡでのみ活性化されるＡ２ａアデノシン受容体の活性化に起因する。 アデノシン受容体誘導ｃＡＭＰ調整に対するヒト脳内皮細胞の感受性を決定するために、ヒト脳内皮細胞を様々な濃度のアデノシン受容体アゴニストを用いて培養し、その後、図１３に示されているようにｃＡＭＰレベル分析を行った。 ＨＣＭＥＣＤ３細胞を２４ウェルプレート上でコンフルエントまで増殖させた。 アデノシン受容体（「ＡＲ」）刺激はｃＡＭＰレベルに影響を及ぼすことが知られているので、様々な濃度のＮＥＣＡ（一般的なＡＲアゴニスト）、ＣＣＰＡ（Ａ１ＡＲアゴニスト）、ＣＧＳ ２１８６０（Ａ２ＡＡＲアゴニスト）、ＤＭＳＯ媒体、またはＦｏｒｋｓｏｌｉｎ（ｃＡＭＰを誘導する）を用いて、あるいは用いずに細胞を処理した。 複製サンプルを各条件に使用した。 ｃＡＭＰ Ｓｃｒｅｅｎキット（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、カリフォルニア州フォスター・シティー）を使用して、ｃＡＭＰレベルを検定した。 図１３に示されているように、広域スペクトルアデノシン受容体アゴニストＮＥＣＡはｃＡＭＰレベルを増加させた。 このことは、これらの細胞がアデノシン受容体シグナル伝達に応答できることを立証している。 高レベルのＣＣＰＡ、Ａ１アデノシン受容体アゴニストは、ｃＡＭＰレベルを増加させた。 この場合もやはり、おそらく、ＣＣＰＡに対してより低い親和性を有し、そのため高レベルのＣＣＰＡでのみ活性化されるＡ２ａアデノシン受容体の活性化に起因する。 Ａ２ａアデノシン受容体アゴニストであるＣＧＳは、ヒト脳内皮細胞株においてｃＡＭＰレベルをわずかに増加させた。 Ａ２ａアデノシン受容体アンタゴニストは、マウスをＥＡＥから保護する。 Ａ１アデノシン受容体を欠くマウスは野生型対照よりもより重篤なＥＡＥを発症する傾向があるのであろうか？この質問に答えるために、野生型マウス、およびＡ１アデノシン受容体ヌルマウスの疾患プロファイルを比較した。 図１４に結果を図示したように、Ａ１ＡＲＫＯマウスは、野生型よりもより重篤なＥＡＥを発症させ、また、野生型よりもより速い速度で疾患を発症させる。 さらに詳細には、マウスに、水中の０．６ｇ／Ｌカフェイン（Ｓｉｇｍａ、ミズーリ州セントルイス）、または普通の水を５日間適宜給餌した。 マウスにＦＩＴＣデキストラン（１０，０００ＭＷ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｐｒｏｂｅｓ、オレゴン州ユージーン）を腹腔内注射し、３０分後、マウスを氷冷ＰＢＳで左心室を介して灌流した。 結果を図１５に示した。 図１６は、野生型マウスの結果をグラフの形で示している。 ＮＥＣＡは、Ａ１、Ａ２ＡおよびＡ３アデノシン受容体に対する同様の親和性を有し、また、Ａ２ｂアデノシン受容体に対する低い親和性を有する、非選択的アデノシン受容体アゴニストである。 その後、ＮＥＣＡまたはＰＢＳを第３日目、第５日目、第７日目、および第９日目に１日おきに投与した。 エバンスブルーを投与して６時間後に、ケタミン／キシラジン混合物でマウスに麻酔をし、左心室を介して氷冷ＰＢＳで灌流した。 組織をＤＭＦ中で７２時間、室温でインキュベートして色素を抽出した。 データは、ｐｇ エバンスブルー／ｍＬ ＤＭＦとして表し、図１７に示されている。 この実験は、一般的なアデノシン受容体アゴニストＮＥＣＡでマウスを処置することが、ＥＡＥに対して免疫化されたマウスのＣＮＳ内にエバンスブルー色素が移動することを誘導する、ということを証明している。 このことは、ＥＡＥモデルにおける血液脳関門がアデノシン受容体の活性化を通して調節されうる、ということを示唆している。 ＮＥＣＡで処置された野生型ＥＡＥマウスは、ＰＢＳ対照ＥＡＥマウスを超えるＢＢＢ透過性の増加を示している。 好ましい実施形態が本明細書において詳細に描写され説明されたが、様々な修正、追加、置換などを本発明の精神から逸脱することなく実施することが可能であり、したがってこれらは以下の特許請求の範囲に定めされるとおり本発明の範囲内にあると見なされることは、当業者にとっては明らかであろう。 対象における血液脳関門透過性を増加させる方法であって、 増加した血液脳関門透過性から利益を得る可能性のある対象を選択する段階と、 前記対象における血液脳関門透過性を増加させるのに有効な条件下で、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる治療に、前記選択された対象を供する段階と、を含む、方法。 前記選択された対象を、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させる治療に供する、請求項１に記載の方法。 前記選択された対象を、アデノシン受容体を調節する治療に供する、請求項１に記載の方法。 Ａ２ａアデノシン受容体アゴニストが投与される、請求項３に記載の方法。 Ａ１アデノシン受容体アンタゴニストが投与される、請求項３に記載の方法。 前記選択された対象を、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる治療に供する、請求項１に記載の方法。 前記選択された対象が、精神医学的／行動性障害およびＣＮＳ疾患からなる群から選択される状態を有している、請求項１に記載の方法。 前記選択された対象が、統合失調症、躁鬱病、認知症、および、双極性障害からなる群から選択される精神医学的／行動性障害を有している、請求項７に記載の方法。 対象における血液脳関門透過性を減少させる方法であって、 減少した血液脳関門透過性から利益を得る可能性のある対象を選択する段階と、 前記対象における血液脳関門透過性を減少させるのに有効な条件下で、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を減少させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を減少させる治療に、前記選択された対象を供する段階と、を含む、方法。 前記選択された対象を、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を減少させる治療に供する、請求項９に記載の方法。 前記選択された対象を、アデノシン受容体を調節する治療に供する、請求項９に記載の方法。 Ａ２ａアデノシン受容体アンタゴニストが投与される、請求項１１に記載の方法。 Ａ１アデノシン受容体アゴニストが投与される、請求項１１に記載の方法。 前記選択された対象を、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を減少させる治療に供する、請求項９に記載の方法。 前記対象が、炎症性疾患を有している、請求項９に記載の方法。 前記対象が、リンパ球が脳内に入り込むことによって媒介される状態を有している、請求項９に記載の方法。 前記対象が、髄膜炎、多発性硬化症、視神経脊髄炎、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）脳炎、および進行性多巣性白質脳症からなる群から選択される状態を有している、請求項１７に記載の方法。 中枢神経系の障害または状態について対象を治療する方法であって、 前記中枢神経系の前記障害または状態を有している対象を選択する段階と、 前記中枢神経系の前記障害または状態を治療するのに有効な治療用物質を提供する段階と、 アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる血液脳関門透過剤を提供する段階と、 前記治療用物質および前記血液脳関門透過剤を、前記治療用物質が血液脳関門を通過して前記障害または状態を治療するのに有効な条件下で、前記選択された対象に投与する段階と、を含む、方法。 前記治療用物質および前記血液脳関門透過剤が、共に結合される、請求項１９に記載の方法。 前記血液脳関門透過剤が、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させる、請求項１９に記載の方法。 前記血液脳関門透過剤が、アデノシン受容体を調節する、請求項１９に記載の方法。 Ａ２ａアデノシン受容体アゴニストが投与される、請求項２２に記載の方法。 Ａ１アデノシン受容体アンタゴニストが投与される、請求項２２に記載の方法。 前記血液脳関門透過剤が、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる、請求項１９に記載の方法。 前記投与する段階が、静脈内に行われる、請求項１９に記載の方法。 血液脳関門透過性を増加させるのに効果的な化合物を選別する方法であって、 未改変の動物と比較して、低下したＣＤ７３発現レベル、低下したアデノシン発現レベル、および／または、調節されたアデノシン受容体活性を有する改変された動物を提供する段階と、 １つまたは複数の候補化合物を提供する段階と、 前記１つまたは複数の候補化合物を前記改変された動物に投与する段階と、 前記１つまたは複数の候補化合物がアデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させるかどうかを評価する段階と、 前記改変された動物において、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させるこれら候補化合物を、血液脳関門透過性を増加させるのに潜在的に効果的であるとみなす段階と、を含む、方法。 中枢神経系の障害または状態を治療するのに有効な治療用物質と、 アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる、血液脳関門透過剤と、を含む、薬剤。 前記治療用物質および前記血液脳関門透過剤が、共に結合されている、請求項２８に記載の薬剤。 本発明は、対象における血液脳関門透過性を増加させる方法に関する。 この方法は、増加した血液脳関門透過性から利益を得る可能性のある対象を選択する段階、および、選択された対象を治療に供する段階を含む。 この治療は、前記対象における血液脳関門透過性を増加させるのに有効な条件下で、アデノシンレベルおよび／または生物学的利用能を増加させ、アデノシン受容体を調節し、ならびに／あるいは、ＣＤ７３レベルおよび／または活性を増加させる。 対象において血液脳関門透過性を減少させる方法、中枢神経系の障害または状態について対象を治療する方法、および、血液脳関門透過性を増加させるのに効果的な化合物を選別する方法、ならびに、薬剤も開示する。
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